自動細胞計數(shù)儀法采用體細胞自動計數(shù)儀,設(shè)置有兩個電極并設(shè)定脈沖的臨界水平,當牛乳體細胞通過電極狹縫時會改變液體的電導(dǎo)性從而產(chǎn)生電脈沖,高過臨界水平而被記錄下來,從而計算出牛乳的體細胞數(shù)量。但此方法需要加入固定試劑甲醛,并需要培養(yǎng)10多個小時的試劑,前期處理麻煩且費時。
體細胞數(shù)(SomaticCellCount,SCC)指的是每毫升牛乳中的細胞總數(shù)。體細胞中大部分是白細胞(即淋巴細胞、嗜中性白細胞和巨噬細胞),大約占總數(shù)的98%~99%,剩余1%~2%的體細胞是乳腺組織上脫落的上皮細胞。
乳業(yè)發(fā)達國家把牛乳體細胞數(shù)量作為新鮮牛奶的收購標準之一,其體細胞數(shù)的測定已經(jīng)成為一種日常工作。牛乳體細胞數(shù)的檢測方法主要包括以下幾種:
一、體細胞計數(shù)的標準方法
體細胞計數(shù)的標準方法是最早期的檢測方法,采用顯微鏡檢測,通過把牛奶涂抹于計數(shù)板中干燥,染色再干燥,清洗再干燥后,在顯微鏡下觀察,人工計數(shù)并折算每毫升牛乳的體細胞數(shù)。此方法準確性高,可用作其他快速檢測方法的校準方法,但該方法制作過程繁瑣,需要的時間較多,不適合在奶廠進行現(xiàn)場實時檢測。
二、熒光顯微計數(shù)法
熒光顯微計數(shù)法與牛乳體細胞計數(shù)的標準方法大致相同,其改進為對體細胞進行熒光染色,通過熒光顯微鏡進行檢測,省去了多次干燥環(huán)節(jié),但此方法依然費時費力。
三、CMT法
CMT方法屬于化學(xué)方法,采用化學(xué)試劑破壞牛乳的體細胞,使其釋放出DNA而產(chǎn)生沉淀或凝塊,觀察沉淀的多少可以間接判斷出體細胞數(shù)的相對值。此方法是憑經(jīng)驗得到體細胞數(shù)的大致范圍,不能得到具體數(shù)值。
四、自動體細胞計數(shù)儀法
自動體細胞計數(shù)儀法采用體細胞自動計數(shù)儀,設(shè)置有兩個電極并設(shè)定脈沖的臨界水平,當牛乳體細胞通過電極狹縫時會改變液體的電導(dǎo)性從而產(chǎn)生電脈沖,高過臨界水平而被記錄下來,從而計算出牛乳的體細胞數(shù)量。但此方法需要加入固定試劑甲醛,并需要培養(yǎng)10多個小時的試劑,前期處理麻煩且費時。
流式細胞計數(shù)法是自動體細胞計數(shù)儀法的衍生,其測定原理是用熒光染色劑對體細胞進行染色,染色后的細胞在激勵光源的刺激下發(fā)射熒光信號,而儀器可將光信號轉(zhuǎn)化為電信號,強迫細胞一個一個地通過縫隙管道并記錄細胞個數(shù)。此方法在現(xiàn)有的各國先進細胞分析儀中使用,檢測速度迅速但準確度不能保證,且價格普遍昂貴,用于大型衛(wèi)生檢測中心較多,而不具有普及到普通奶場的條件。